“奧密克戎”來襲
一份核酸檢測陰性報告
成為必要的“通行證”
結(jié)果就出現(xiàn)了以下情景
很多人以為
核酸檢測就像血常規(guī)一樣
取標(biāo)本
▽
放儀器上檢測
▽
很快出結(jié)果
結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)——
到底是怎么回事？
專業(yè)人士終于做出了解答——
真正的核酸檢測，沒你想的那么簡單！
Step 1 標(biāo)本采集
這一步大家都懂，“捅嗓子眼兒”“捅鼻子眼兒”。
采集后將拭子頭浸入病毒保存液中保存，全城大篩查中通常是10個拭子一組進(jìn)行保存。
Step 2 集合轉(zhuǎn)運(yùn)
在全城大篩查中，核酸采樣地點(diǎn)通常是社區(qū)、學(xué)校等臨時采樣點(diǎn)，而檢測點(diǎn)是有嚴(yán)格的生物安全和質(zhì)量要求的實驗室。因此，鼻、咽拭子在采樣點(diǎn)集合后，被“全副武裝”送往實驗室。
Step 3 核收消毒
在嚴(yán)密保護(hù)下，標(biāo)本被“護(hù)送”到檢測實驗室，由接收人員登記、核對。
全方位消毒，準(zhǔn)備進(jìn)入檢測環(huán)節(jié)。
Step 4 全面防護(hù)
進(jìn)入樣本處理區(qū)域前，檢測人員需做到100%的安全防護(hù)。
Step 5 信息錄入
完成全面防護(hù)的工作人員進(jìn)入樣本處理區(qū)，將樣本在生物安全柜內(nèi)打開，取出樣本消毒并錄入信息系統(tǒng)。目前信息錄入有兩種，一種是條碼錄入，需要“滴”一聲解決；另一種是手工填寫的單子，需要挨個摘錄到系統(tǒng)中。
Step 6 試劑配制
根據(jù)待檢樣本數(shù)量配置好核酸檢測必備的試劑和輔助材料，精準(zhǔn)配制和分裝反應(yīng)體系。為了提高效率，這一步和接下來的兩步通常由不同的檢測人員同時進(jìn)行。
Step 7 核酸提取
① 裂解
在進(jìn)行核酸檢測前，必須先用胍鹽把花花綠綠的蛋白質(zhì)“馬甲”給脫了，才能將病毒的核酸釋放出來，露出病毒的“真面目”。
② 結(jié)合
加入磁珠與核酸結(jié)合。與各種細(xì)胞碎片、蛋白質(zhì)說“拜拜”啦！
“我們的目標(biāo)是？”“抓住核酸！”
③ 洗滌
結(jié)合一次就能抓到核酸了？哪有那么輕松哦！抓是抓到了，不過還是有少量的碎片、蛋白跟著核酸一起被黏上了。如何提高核酸的純度？我們有兩大法寶：加鹽，加酸。
“吸附核酸-高鹽低pH”、“洗脫核酸-低鹽高pH”，反復(fù)兩三次的吸附、洗脫，實現(xiàn)核酸的提取純化。剩下的就是“赤裸裸”的核酸啦。
Step 8 核酸擴(kuò)增
新冠病毒核酸檢測常規(guī)篩查采用的是實時熒光PCR方法。PCR技術(shù)于1983年由美國著名化學(xué)家凱利·穆利斯（Kary Banks Mullis）發(fā)明，并獲得1993年諾貝爾化學(xué)獎。PCR技術(shù)是通過模擬生物體體內(nèi)DNA復(fù)制的方式，在體外選擇性地將DNA某個特殊區(qū)域擴(kuò)增出來的技術(shù)。
PCR反應(yīng)就像一個大型裝配車間。想要擴(kuò)增某個病毒片段，首先根據(jù)它的特點(diǎn)設(shè)計一對引物。引物就是最有力的識別并定位的“抓手”，具有“指哪打哪”的精確性。在一群病毒核酸中，想抓新冠還是流感，抑或是鼻病毒、呼吸道合胞病毒等，只有你想不到，沒有他抓不到。
當(dāng)他識別到新冠病毒的“特點(diǎn)”——特異性的片段，馬上一前一后“抓捕”，再添加dNTP、Mg2+、Taq酶等原材料，調(diào)節(jié)不同的溫度，歷經(jīng)“變性-退火-延伸”三大步，完成病毒核酸組裝。每擴(kuò)增一次，DNA產(chǎn)量呈指數(shù)增長。新冠病毒擴(kuò)增一般需要40個循環(huán)，理論上1個拷貝可以得到240=1,099,511,627,776個拷貝。即使樣本中病毒含量很低，都可以通過PCR擴(kuò)增檢測出來。因此PCR反應(yīng)有高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)。
240個核酸片段拷貝，數(shù)量是很多，但無色無味又看不見，“敵在暗處”怎么辦？那我們就讓他在“明處”！實時熒光PCR反應(yīng)就是在PCR反應(yīng)基礎(chǔ)上加入探針，每擴(kuò)增出目標(biāo)片段即會發(fā)出熒光，被熒光探測器捕獲。
隨著擴(kuò)增次數(shù)的增加，熒光量累積，就是我們看到的曲線圖了，我們就是通過它來判斷有沒有新冠病毒的。
“咦，醫(yī)生，為啥陽性曲線圖和陰性曲線圖里面都有個陽性的曲線喃？是不是陰性被污染了哦？”
“莫慌，那個是人類管家基因，就是人類所有細(xì)胞都穩(wěn)定表達(dá)的基因。”
“我是查新冠病毒，這個什么“管家”是來干啥呢？”
“這個是用來監(jiān)測采樣、運(yùn)輸以及檢測過程的！”
“是不是管家基因陽性就代表采樣部位沒問題呢？”
“這可不一定，管家基因嘛，只能代表采到人體組織了，至于是否采到病毒潛伏部位，這可不一定?！?/p>
檢測過程中不能停下來添加新標(biāo)本，必須等待這一批擴(kuò)增完成，才能進(jìn)行下一批的擴(kuò)增，這也是標(biāo)本不能隨到隨檢的原因之一。一個大型的實驗室內(nèi)，核酸擴(kuò)增設(shè)備多達(dá)上百臺，同時不間斷工作的檢測人員有數(shù)百人。
Step 9 檢后處理
為防止可能出現(xiàn)的污染，相關(guān)樣本在檢測結(jié)束后密封放入指定專用醫(yī)療垃圾桶中，并進(jìn)行高壓滅菌處理。
Step 10 結(jié)果出爐
到這一步，檢測人員還需查看結(jié)果、核對標(biāo)本信息、上傳數(shù)據(jù)，再由大數(shù)據(jù)平臺進(jìn)行處理和發(fā)布，大家就可以在網(wǎng)上查詢到核酸檢測結(jié)果了！
來源：漢臺疾控
